水質(zhì)微生物檢測是保障飲用水安全、監(jiān)控水環(huán)境質(zhì)量的核心環(huán)節(jié)，總大腸菌群、糞大腸菌群及大腸埃希氏菌等指示菌的快速精準檢出，直接關(guān)系到公共衛(wèi)生安全與環(huán)境監(jiān)管效率。隨著GB/T5750-2023《生活飲用水標準檢驗方法》與HJ1001-2018《水質(zhì)總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定酶底物法》等標準的實施，以酶底物法為代表的預制試劑技術(shù)憑借高效、便捷的優(yōu)勢，逐步取代傳統(tǒng)檢測方法成為行業(yè)主流。本文結(jié)合環(huán)凱生物酶底物法檢測系統(tǒng)（含質(zhì)控樣）的實踐應用，系統(tǒng)梳理預制試劑的技術(shù)價值與方法驗證規(guī)范。

一、預制試劑的技術(shù)突破：重塑水質(zhì)微生物檢測效率

傳統(tǒng)水質(zhì)微生物檢測依賴人工配制培養(yǎng)基，存在操作繁瑣、周期冗長、結(jié)果穩(wěn)定性差等痛點。預制試劑通過標準化生產(chǎn)工藝實現(xiàn)檢測流程革新，其核心優(yōu)勢集中體現(xiàn)在三方面：

1.雙標適配，合規(guī)性全覆蓋

優(yōu)質(zhì)預制試劑需深度貼合國家檢測標準要求。環(huán)凱生物自主研發(fā)的MMO-MUG培養(yǎng)基，嚴格遵循GB/T5750-2023與HJ1001-2018中酶底物法技術(shù)規(guī)范，針對生活飲用水、地表水、地下水、生活污水及工業(yè)廢水等多類基質(zhì)均能實現(xiàn)精準檢測。該產(chǎn)品通過100株標準菌株與臨床分離株驗證，對大腸菌群的特異性達100%，無假陰性結(jié)果，且能有效抑制非目標菌干擾，解決傳統(tǒng)方法假陽性難題。

2.高效便捷，檢測周期大幅縮短短

預制試劑的即用型設計顯著降低操作門檻。環(huán)凱酶底物法檢測系統(tǒng)僅需“取樣-試劑添加-恒溫培養(yǎng)-結(jié)果判讀"4步操作，平均每分鐘可完成一份樣品檢測，培養(yǎng)周期僅24小時，較傳統(tǒng)多管發(fā)酵法縮短50%以上。對于應急檢測場景，無需復雜前處理即可快速出具初步篩查結(jié)果，滿足突發(fā)水污染事件的處置需求。

3.精準靈敏，低濃度檢出有保障

靈敏度是水質(zhì)微生物檢測的核心指標。環(huán)凱MMO-MUG培養(yǎng)基可精確檢出低濃度的目標菌。通過顏色變化與熒光信號的雙重判讀機制，總大腸菌群（黃色反應）與大腸埃希氏菌（黃色+熒光）的區(qū)分度達99%以上，為水質(zhì)污染程度的精準評估提供數(shù)據(jù)支撐。

二、全場景應用方案：適配多元檢測需求

預制試劑的模塊化設計使其可靈活應對不同場景的檢測需求，結(jié)合環(huán)凱生物檢測系統(tǒng)的實踐案例，主要應用模式包括三類：

1.定性篩查：快速判斷污染狀態(tài)

適用于飲用水出廠檢驗、管網(wǎng)水質(zhì)巡檢等快速篩查場景。操作流程為：取100mL水樣加入無菌取樣瓶，投入MMO-MUG培養(yǎng)基溶解后，36±1℃培養(yǎng)24小時。若溶液無顏色變化即為陰性；變黃則提示總大腸菌群陽性；變黃且經(jīng)366nm紫外燈照射顯熒光，可判定為大腸埃希氏菌陽性。該方法無需專業(yè)儀器，自來水廠實驗室即可獨立完成。

2.定量分析：精準核算污染濃度

針對環(huán)境監(jiān)測站、第三方實驗室等定量需求，可采用97孔定量盤法和51孔定量盤法。培養(yǎng)后通過統(tǒng)計黃色孔格數(shù)（總大腸菌群）與黃色熒光孔格數(shù)（大腸埃希氏菌），對照MPN表即可計算濃度值。若需檢測糞大腸菌群，僅需將培養(yǎng)溫度調(diào)整至44.5℃，操作流程保持一致，實現(xiàn)“一體系多指標"檢測。

3.合規(guī)檢測：滿足國標10管法要求

嚴格遵循GB/T5750.12-2023標準要求，取100mL水樣與培養(yǎng)基混合后，分裝至10支無菌試管，36±1℃培養(yǎng)24小時后統(tǒng)計陽性管數(shù)，配合紫外燈箱，對照標準MPN表獲取結(jié)果。該方案已通過多地疾控中心驗證，結(jié)果與濾膜法一致性達98%以上，可直接用于資質(zhì)認定實驗室的合規(guī)報告出具。

三、方法驗證核心指南：基于質(zhì)控體系的可靠性保障

根據(jù)GB27043-2023與CNAS-CL01-A001-2022要求，預制試劑的檢測方法需通過系統(tǒng)性驗證，環(huán)凱生物質(zhì)控樣體系為驗證提供標準化解決方案：

1.質(zhì)控樣操作實施流程

環(huán)凱可追溯性質(zhì)控樣為方法驗證提供關(guān)鍵支撐，具體操作步驟如下：
1）準備300mL無菌稀釋液（水或PBS緩沖液）與1個300mL以上無菌瓶；
2）質(zhì)控樣凍干粉室溫平衡10-15分鐘，加入3mL稀釋液溶解后轉(zhuǎn)移至無菌瓶；
3）多次沖洗凍干粉瓶并將洗液并入無菌瓶，補加剩余稀釋液至300mL，充分振蕩混勻；
4）分裝入3個100mL取樣瓶（每瓶100mL），各加入1袋MMO-MUG培養(yǎng)基；
5）混勻后倒入97孔定量盤或51孔定量盤封膜，36±1℃培養(yǎng)24小時（測試糞大腸菌群需在44.5℃±1℃培養(yǎng)24小時）；
6）判讀陽性孔數(shù)并計算MPN值，結(jié)果需在質(zhì)控樣真值范圍內(nèi)即為驗證合格。

2.日常質(zhì)量控制要點

• 每次檢測需設置空白對照（無菌稀釋液+培養(yǎng)基）與陽性對照（質(zhì)控樣），確保無交叉污染；
  

• 培養(yǎng)基儲存需嚴格遵循2-8℃密封條件；
  

• 培養(yǎng)溫度需校準至±0.5℃精度，避免溫度偏差導致結(jié)果數(shù)據(jù)偏移。

四、行業(yè)應用價值與發(fā)展方向

預制試劑的普及正在推動水質(zhì)微生物檢測向“快響應、高精度、低成本"轉(zhuǎn)型。環(huán)凱生物酶底物法檢測系統(tǒng)已在全國20余個省份的自來水廠、環(huán)境監(jiān)測站投入使用，單批次檢測成本較傳統(tǒng)方法降低40%，應急檢測響應時間縮短至24小時內(nèi)。隨著智能化檢測設備的發(fā)展，未來預制試劑將進一步與物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)結(jié)合，實現(xiàn)“取樣-檢測-數(shù)據(jù)上傳"全流程自動化，為智慧水務建設提供核心技術(shù)支撐。

從實驗室合規(guī)檢測到現(xiàn)場應急篩查，預制試劑以技術(shù)創(chuàng)新重構(gòu)了水質(zhì)微生物檢測的范式。選擇符合國標要求、具備完善質(zhì)控體系的產(chǎn)品（如環(huán)凱生物QS質(zhì)控菌系列），并嚴格執(zhí)行方法驗證規(guī)范，是保障檢測數(shù)據(jù)可靠性、守護水環(huán)境安全的關(guān)鍵所在。